Аннотация:Последним этапом трансляционного цикла является рибосомный рециклинг, который включает отсоединение большой рибосомной субчастицы, диссоциацию тРНК и уход малой субчастицы из комплекса с мРНК. У эукариот, мРНК которых в основном моноцистронны, 40S субчастица обычно диссоциирует после прочтения длинных рамок считывания. Однако после коротких рамок, которые встречаются в 5’-нетранслируемых областях мРНК (uORF), она может оставаться на мРНК и реинициировать трансляцию. Эти процессы регулируют белок eIF2D (у дрожжей именуемый Tma64p) и гетеродимер MCTS1·DENR (Tma20p·Tma22p). Они имеют в своём составе консервативный SUI1-домен, который связывается с Р-сайтом рибосомы. Однако механизм работы этих белков и распределение их ролей остаётся малопонятным.В данной работе с помощью репортерных конструкций мы измеряли частоту реинициации трансляции после короткой uORF или после длинной рамки, кодирующей полноценный белок, в клетках пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Мы сравнивали штаммы дикого типа, нокауты по генам TMA20, TMA22 и TMA64 (индивидуальные, двойные и тройные) и нокаутные клетки с введённым геном, кодирующим Tma22p с делециями или аминокислотными заменами в SUI1-домене. Наши результаты показывают больший вклад гетеродимера Tma20p·Tma22p, чем белка Tma64p, в регуляцию реинициации после uORF, а также важность консервативной положительно заряженной β-петли в SUI1-домене Tma22p, участвующей в распознавании кодон-антикодонового дуплекса. Работа выполнена при финансовой поддержке РНФ, проект 23-14-00218.
