Структурно-функциональный анализ фактора рибосомного рециклинга Tma22p и его активности в реинициации трансляции в пекарских дрожжах Saccharomyces cerevisiaeтезисы доклада
Аннотация:Рибосомный рециклинг является последним этапом трансляционного цикла и включает в себя отсоединение большой рибосомной субчастицы, диссоциацию тРНК и уход малой субчастицы из комплекса с мРНК. В случае моноцистронных мРНК, преобладающих у эукариот, 40S субчастица обычно диссоциирует после прочтения длинных рамок считывания. Однако после коротких рамок, встречающихся в 5’-нетранслируемых областях (uORF), она может оставаться на мРНК и реиницировать трансляцию. У дрожжей эти процессы регулируют белок Tma64p и гетеродимер Tma20p·Tma22p. Они имеют в своём составе SUI1-домен, гомологичный таковому у фактора инициации трансляции eIF1. Однако механизм работы данных белков и распределение их ролей остаётся мало изученным. В данной работе с помощью репортерных конструкций мы измеряли частоту реинициации трансляции после короткой uORF или после длинной рамки, кодирующей полноценный белок, в клетках пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Мы сравнили штамм дикого типа с нокаутными клетками tma64Δtma22Δ, содержащими введённый ген, кодирующий Tma22p c делециями или аминокислотными заменами в SUI1-домене. Также была оценена активность химерного белка, состоящего из N-концевого домена Tma22p и SUI1-домена фактора eIF1. Кроме того, было проанализировано влияние нокаутов генов TMA20, TMA22 и TMA64 (индивидуальные, двойные, тройные) на реинициацию. Полученные результаты показали важность консервативной положительно заряженной β-петли в SUI1-домене Tma22p, участвующей в распознавании кодон-антикодонового дуплекса и больший вклад гетеродимера Tma20p·Tma22p, чем фактора Tma64p, в контроль реинициации трансляции после прочтения uORF.