Аннотация:Хроматин эукариот представляет собой высокоорганизованную и динамичную струк-туру, состоящую из ДНК и ассоциированных белков. Эти белки обеспечивают точнуюрегуляцию ключевых процессов, включая экспрессию генов, репликацию и репарациюДНК. Важнейшими регуляторами архитектуры хроматина из негистоновых белков, яв-ляются p53 и PARP1, которые участвуют в ответе клетки на повреждения ДНК. В на-стоящей работе проведено исследование кооперативного и конкурентного связыванияДНК-связывающего домена (DBD, DNA-Binding Domain) белка p53, и ферментаPARP1 с мононуклеосомами, реконструированными на основе последовательностиWidom 603 с встроенным сайтом связывания p53. Для детекции взаимодействий ис-пользован метод электрофоретического сдвига подвижности (EMSA, ElectrophoreticMobility Shift Assay) с флуоресцентно меченой ДНК. Комплексы формировали двумяспособами: предварительно инкубировали нуклеосомы с p53 DBD и затем добавлялиPARP1, либо сначала получали комплекс нуклеосома–PARP1 и затем вносили p53DBD. Результаты показали, что порядок добавления белков определяет характер ихвзаимодействия с нуклеосомой: при низких концентрациях p53 наблюдается вытесне-ние этого белка PARP1, тогда как при повышении концентрации p53 формируютсястабильные комплексы нуклеосома–p53, не нарушенные белком PARP1. Стабильныхтройных комплексов нуклеосома–p53–PARP1 не обнаружено