Сравнение эффективности выявления метилирования ДНК, специфичного для рака шейки матки, методами цифровой капельной ПЦР и ПЦР в реальном временитезисы доклада
Аннотация:Рак шейки матки (РШМ) занимает 8-е место по заболеваемости и 9-е по смертности среди всех онкологических заболеваний. Ключевым фактором развития РШМ является инфицированность ВПЧ, а существующие цервикальные интраэпителиальные неоплазии (ЦИН) могут быть предикторами опухолеобразования. Современные методы диагностики, кольпоскопия и онкоцитология, обладают недостатками: высокая стоимость и низкая чувствительность,соответственно. Одним из наиболее перспективных биомаркеров является опухоль-специфическое метилирование ДНК в цервикальных мазках.Цель исследования – сравнение эффективности выявления гиперметилирования генов CADM1, MAL, PAX1 опухоли разными видами ПЦР.Методы. В исследовании принимали участие 99 человек, из которых 34 пациента без ЦИН, 15 – с ЦИН 1-й степени, 12 – с ЦИН 2/3-й степени, 12 – с РШМ и 26 – без ВПЧ с отрицательным результатом цитологии (группа контроля). Критерием включения в экспериментальные группы было наличие ВПЧ-положительного статуса. ДНК, выделенная из цервикальных мазков, подвергалась бисульфитной конверсии, полнота которой подтверждалась постановкой ПЦР в реальном времени (ПЦРрв) на неконвертированный консервативный участок ДНК. Анализ ДНКпроводился с помощью ПЦРрв и цифровой капельной ПЦР (цкПЦР). Детекция гиперметилирования производилась в генах CADM1, MAL, PAX1, при этом ген ACTB выбран внутренним контролем. Доклиническая валидация реагентов происходила на тотальнометилированной и неметилированной ДНК человека.Результаты. Уровень метилирования, определенный методом цкПЦР, был значимо выше, чем уровень, определенный с помощью ПЦРрв, что было аналогично и для частоты выявления метилирования: CADM1 – 22.2% и 0%, PAX1 – 77.8% и 0%, MAL – 11.1% и 5.6%, соответственно(p < 0.05). Из-за низкой частоты детекции метилирования и отсутствия значимой связи результатов ПЦРрв с клиническими характеристиками далее представлены данные, полученные цкПЦР.Частота выявления метилирования CADM1 оказалась выше у группы с ВПЧ высокоонкогенного типа по сравнению с ВПЧ-негативной группой (30.7% против 3.7%, p = 0.005). Наилучший диагностический потенциал для выявления РШМ показала панель CADM1+MAL с площадью под ROC-кривой 0.912, чувствительностью 70% и специфичностью 100%.Заключение. цкПЦР показала больший аналитический потенциал по сравнению с ПЦРрв, подчеркивая перспективность данного метода при анализе метилирования ДНК. Комбинация маркеров CADM1+MAL позволяет с высокой точностью дифференцировать образцы мазковпациентов с РШМ даже при низких фракциях опухолевой ДНК.
