|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ПсковГУ |
||
Разработка упрощённого протокола иммуномечения для идентификации биообъектовтезисы доклада
- Авторы: Внукова А.А., Багров Д.В., Семина С.Е., Якупова Р.Д., Ивин Ю.Ю., Ковпак А.А., Пиняева А.Н.
- Сборник: 28-я Пущинская школа-конференция молодых ученых с международным участием «Биология – наука XXI века»
- Тезисы
- Год издания: 2025
- Место издания: ФИЦ ПНЦБИ РАН Пущино
- Первая страница: 172
- Последняя страница: 172
- Аннотация: Иммуномечение позволяет решить проблему идентификации белоксодержащихобъектов, исследуемых с помощью просвечивающей электронной микроскопии. Суть методазаключается в выявлении специфичных антигенов на поверхности образца с помощью всеголишь двух основных реагентов: антител и используемых для проявления связыванияконъюгатов на основе наночастиц золота. Однако, иммуномечение редко применяют напрактике, так как оно представляет собой трудоёмкую процедуру, занимающую 3–5 часов.Методика иммуномечения включает блокировку поверхности альбумином дляминимизации неспецифического связывания с последующим нанесением антител противцелевого антигена и конъюгата. Каждый этап сопровождается отмывкой одномолярнымфосфатно-солевым буфером. Завершающим этапом является окрашивание уранилацетатомдля повышения контрастности образца. Результаты оценивают путём вычислениянормированной специфичности, которая отражает эффективность связывания конъюгатов сбиообъектом с учётом доли его площади на снимке.Нам удалось адаптировать методику и сократить её длительность до ~2 часов за счётуменьшения времени наиболее продолжительных шагов – инкубации, блокировки и отмывки.В качестве проявляющего агента использовали конъюгаты коллоидного золота с белком А.Наша методика была использована для исследования двух образцов – инактивированноговируса полиомиелита типа I штамма Sabin и внеклеточных везикул из среды культивированияклеток MCF7. Доля специфического связывания равна 93% для вирусов и 86% для везикул.Нормированная специфичность связывания конъюгатов с вирусными частицами и свезикулами составила 3,7 ± 0,5 и 14,8 ± 6,4 соответственно, что свидетельствует о высокойизбирательности связывания, превышающей случайное распределение.Адаптированная методика демонстрирует высокую специфичность иммуномеченияпри значительном сокращении времени проведения анализа. Упрощённый протоколповышает практическую ценность методики, делая её удобной для применения висследованиях широкого круга биологических объектов.Исследование выполнено в рамках государственного задания МГУ имениМ.В. Ломоносова.
- Добавил в систему: Внукова Анна Александровна