BRCA1 УЧАСТВУЕТ В ЛОКАЛИЗАЦИИ РНК XIST НА НЕАКТИВНОЙ Х-ХРОМОСОМЕ

Шестакова, Е.А.; Богуш, Т.А.

Авторы: Шестакова Е.А., Богуш Т.А.
Журнал: Российский биотерапевтический журнал
Том: 18
Номер: 2
Год издания: 2019
Издательство: Изд. группа РОНЦ
Местоположение издательства: М.
Первая страница: 21
Последняя страница: 26
DOI: 10.17650/1726
Аннотация: Введение. Инактивированная Х-хромосома (Xi) ассоциирована с некодирующей РНК XIST, с целым рядом белков и содержитмногочисленные эпигенетические модификации хроматина, что приводит к ингибированию экспрессии большинства геновна этой хромосоме. В последние годы были получены данные, свидетельствующие о том, что супрессор опухолей BRCA1 так-же взаимодействует с Xi.Цель исследования – выявить колокализацию BRCA1 и РНК XIST и детально проанализировать пространственную организациюBRCA1 и РНК XIST на Xi с помощью конфокальной микроскопии с высоким пространственным разрешением и контрастом.Материалы и методы. Объектом исследования служили диплоидные иммортализованные фибробласты человека линииIMR90hTERT.Для локализации BRCA1 и РНК XIST на Xi использовали метод флуоресцентной гибридизации in situ, сопря-женный с иммунофлуоресцентным окрашиванием клеток, и конфокальную микроскопию. Для локализации BRCA1 и белковгетерохроматина-1 использовали метод двойного иммунофлуоресцентного окрашивания клеток и традиционную флуорес-центную микроскопию.Результаты. Впервые исследования, проведенные с использованием конфокальной микроскопии, продемонстрировали на болеевысоком уровне разрешения, чем было представлено в предыдущих работах, колокализацию BRCA1 с зоной РНК XIST на Xi,выявленную с зондами к РНК XIST. C помощью BrdU выявлена также локализация BRCA1 c реплицирующимися участкамиXi и аутосомами в поздней S-фазе клеточного цикла. В целом приведенные данные позволяют предположить участие BRCA1в ингибировании экспрессии генов на Xi, обусловленном влиянием BRCA1 на ассоциацию РНК XIST с Xi. Помимо этого, впер-вые с использованием конфокальной микроскопии выявлена колокализация BRCA1 с реплицирующимися Xi и аутосомами,идентифицированными с использованием BrdU, в поздней S-фазе клеточного цикла, что указывает на возможное участиеэтого белка в репликации перицентромерных повторов хромосом. В поддержку этой гипотезы также свидетельствуютданные о колокализации BRCA1 с белком гетерохроматина-1α, присутствующим в перицентромерных участках всех хромосом.Заключение. Полученные данные указывают на участие BRCA1 в ингибировании экспрессии генов на Xi в результате регуля-ции ассоциации некодирующей ингибирующей РНК XIST с Xi, а также в репликации гетерохроматиновых участков хромосом.Ключевые слова: BRCA1, РНК XIST, инактивированная Х-хромосома (Xi), колокализация, конфокальная микроскопияBRCA1 PARTICIPATES IN XIST RNA LOCAL IZATION ON INACTIVE X CHROMOSOMEE. A. Shestakova, T. A. BogushN.N. Blokhin National Medical Research Center of Oncology of the Ministry of Health of Russia;24 Kashyrskoe Sh., Moscow 115478, RussiaIntroduction. Inactive X chromosome (Xi) is associated with noncoding XIST RNA, series of proteins and contains multiple epigeneticmodifications that altogether determine a silence of the most of X-linked genes. Recently the data were obtained that tumor suppressorBRCA1 is also associated with Xi.The purpose of this study was to reveal the colocalization of BRCA1 and XIST RNA and precise spatial organization on Xi with the highresolution of confocal microscopy.Materials and methods. The object of the study is IMR90hTERT diploid immortalized fibroblast cell line. For BRCA1 and XIST RNAcolocalization analysis on Xi the method of fluorescent hybridization in situ associated with immunofluorescent cell staining (immunoFISH)and confocal microscopy were used. For BRCA1 and heterochromatin protein-1 colocalization study the method of doubleimmunofluorescent staining and common fluorescent microscopy were applied.Results. The study using confocal fluorescent microscopy with higher resolution has demonstrated at first the colocalization of BRCA1with XIST RNA region of Xi revealed with XIST RNA probes and with replicating Xi and autosomes revealed with BrdU in late S-phaseof cell cycle. Altogether, the data obtained suggest the involvement of BRCA1 in the inhibition of gene expression on Xi due to the regulationof XIST RNA association with Xi. Moreover, according to the results of confocal microscopy, BRCA1 also colocalizes with replicatingXi and autosomes revealed with BrdU in late S-phase of cell cycle. This indicates a possible involvement of this protein in the replicationof pericentromeric repeats in cellular chromosomes. Colocalization of BRCA1 with heterochromatin protein-1α presented inpericentromeric regions of all chromosomes supports this suggestion.Conclusions. Altogether, the data obtained in this study suggest the involvement of BRCA1 in the inhibition of gene expression on Xidue to the association with noncoding inhibiting XIST RNA and in replication of heterochromatin regions.Key words: BRCA1, XIST RNA, inactive Х chromosome (Xi), colocalization, confocal microscopy
Добавил в систему: Шестакова Елена Анатольевна

	ИСТИНА	Войти в систему Регистрация
	ИСТИНА ПсковГУ
	Главная Поиск Статистика О проекте Помощь

ИСТИНА

ИСТИНА ПсковГУ

BRCA1 УЧАСТВУЕТ В ЛОКАЛИЗАЦИИ РНК XIST НА НЕАКТИВНОЙ Х-ХРОМОСОМЕстатья Исследовательская статья

Прикрепленные файлы