КОЛИЧЕСТВЕННАЯ ОЦЕНКА УРОВНЯ ЭКСПРЕССИИ БЕЛКА BRCA1 В ТКАНИ РАКА МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МЕТОДА ПРОТОЧНОЙ ЦИТОФЛУОРИМЕТРИИ

Богуш, Т.А.; Дудко, Е.А.; Шестакова, Е.А.; Гришанина, А.Н.; Богуш, Е.А.; Кирсанов, В.Ю.; Рябинина, О.М.; Вихлянцева, Н.О.

Авторы: Богуш Т.А., Дудко Е.А., Шестакова Е.А., Гришанина А.Н., Богуш Е.А., Кирсанов В.Ю., Рябинина О.М., Вихлянцева Н.О.
Журнал: Российский биотерапевтический журнал
Том: 15
Номер: 4
Год издания: 2016
Издательство: Изд. группа РОНЦ
Местоположение издательства: М.
Первая страница: 49
Последняя страница: 52
DOI: 10.17650/1726-9784-2016-15-4-49-52
Аннотация: Введение. Нарушение функционирования BRCA1 приводит к развитию ряда онкологических заболеваний, включая рак молоч-ной железы (РМЖ), рак яичника, немелкоклеточный рак легкого, рак желудка, рак поджелудочной железы. Недавно проде-монстрирована прогностическая и предиктивная значимость BRCA1, белка репарации ДНК ERCC1 в плане характера те-чения заболевания и чувствительности/резистентности к химиотерапии, но заключения неоднозначны.Цель исследования – уточнение возможной прогностической значимости экспрессии в опухоли BRCA1 путем проведениястрого количественной оценки уровня маркера в ткани РМЖ у пациентов c благоприятным и неблагоприятным прогнозомв соответствии со статусом рецепторов эстрогенов (РЭ) в опухолях, различающихся по чувствительности к препаратамплатины.Материалы и методы. Оценка экспрессии BRCA1 проведена в 50 хирургических образцах РМЖ (40 – с положительным ста-тусом РЭ и 10 – с отрицательным) с использованием количественного иммунофлуоресцентного метода, сопряженногос проточной цитофлуориметрией. Суспензии клеток опухоли инкубировали с первичными антителами к BRCA1 (SD118,Calbiochem) и со вторичными флуоресцентными антителами (DyLight650, ab98729, Abcam). Измерение флуоресценции про-водили на проточном цитофлуориметре FACSCanto II (Becton Dickinson, США) с применением программного обеспеченияFACSDiva 6.0. Показатели экспрессии BRCA1 анализировали с помощью программы FlowJo 10.0 с использованием статисти-ческого метода Колмогорова – Смирнова. Уровень экспрессии BRCA1 определяли как количество специфически флуоресциру-ющих клеток относительно общего количества исследованных.Результаты. Экспрессия BRCA1 идентифицирована во всех исследованных образцах ткани РМЖ со средним значением уров-ня экспрессии 36,8 ± 7,6 % и медианой 37 %. При расчете t-критерия Стьюдента отмечено статистически значимое раз-личие средних значений уровня экспрессии BRCA1 (р = 0,02) в группах больных с положительным и больных с отрицательнымстатусом РЭ (38,0 ± 7,5 и 32,0 ± 6,3 % соответственно). Сравнение уровня экспрессии BRCA1 с использованием тестаМанна – Уитни также выявило статистически значимое различие (р = 0,016). Различия в средних значениях уровня экс-прессии BRCA1 оказались особенно выраженными (р = 0,007) при сравнении групп пациентов с положительным и с отрица-тельным статусом РЭ со значениями экспрессии BRCA1 меньше медианы (32,4 ± 5,0 и 26,8 ± 2,9 % соответственно).При сравнении показателей экспрессии BRCA1 в опухолях с негативным статусом РЭ и медианы уровня экспрессии BRCA1по всей группе исследованных опухолей (37 %) выявлена корреляция сниженного уровня экспрессии BRCA1 с отрицательнымстатусом РЭ в опухоли. Значения уровня экспрессии белка BRCA1 ниже медианы выявлены у 80 % пациентов с отрицатель-ным статусом РЭ в опухоли, выше медианы – в 20 % случаев соответственно.Выводы. Результаты исследований показали, что белок BRCA1 экспрессируется на различном уровне в опухолевой тканиу всех пациентов с РМЖ. Пониженный уровень экспрессии BRCA1 выявляется чаще в РЭ-негативных по сравнению с РЭ-по-зитивными опухолями, а отсутствие РЭ в ткани РМЖ является неблагоприятным фактором прогноза, соответственнопониженный уровень экспрессии BRCA1 имеет неблагоприятное прогностическое значение.Ключевые слова: BRCA1, рецепторы эстрогенов, рак молочной железы, проточная цитофлуориметрия, прогнозQuantitative estimation of BRCA1 protein expression in breast cancer tissueusing the met hod of flo w cytometr yТ. А. Bogush, Е. А. Dudko, Е. А. Shestakova, А. N. Grishanina, Е. А. Bogush,V. Ju. Kirsanov, O. M. Ryabinina, N. O. VichljantzevaN. N. Blokhin Russian Cancer Research Center, Ministry of Health of Russia;24 Kashyrskoe shosse, Moscow, 115478, RussiaIntroduction. The disruption of BRCA1 function leads to the development of several cancers including breast cancer, ovarian cancer,non-small cell lung cancer, gastric cancer, pancreatic cancer. Recently it was demonstrated that BRCA1 protein as well as another DNArepair protein, ERCC1, could be prognostic markers of the course of the disease and predictive markers of platinum-based chemotherapyefficiency. Nevertheless, the obtained data are controversial.Aim. In current study the comparison of BRCA1 expression in breast cancer with favorable and unfavorable prognosis based on estrogenreceptor status (ER+ and ER – ) was carried out to evaluate its potential prognostic significance for subsets of breast cancer with differentplatinum chemotherapy sensitivity.Materials and methods. The estimation of BRCA1 expression was made in 50 samples of breast cancer tissue (40 ER+ and 10 ER – )using the quantitative immunofluorescent method coupled with flow cytometry. Tumor cell suspensions were incubated with primaryanti-BRCA1 antibodies (Abs) (SD118, Calbiochem) and secondary fluorescent Abs (DyLight650, ab98729). Cell fluorescence wasmeasured at the Flow Cytometer FACSCanto II (Becton Dickinson, USA) using the program FACSDiva 6.0. The level of BRCA1 expressionwas analyzed using the program FlowJo 10.0 with statistical approach of Kolmogorov-Smirnov. The level of BRCA1 expression wasdetermined as the ratio of specifically fluorescent cells to the total number of cells.Results. 1. The expression of BRCA1 was revealed in all breast cancer samples with mean expression level 36.8 ± 7.6 % and median37 %. 2. Using the method of Student t-test statistically significant difference in mean value of BRCA1 expression level (p = 0.02) wasrevealed between ER+ and ER– breast cancer groups (38.0 ± 7.5 % and 32.0 ± 6.3 %, respectively) 3. Comparison of BRCA1 expressionlevel in ER+ and ER– breast cancer groups using Mann – Whitney test also demonstrated statistically significant difference (p = 0.016).4. These differences in mean value of BRCA1 expression level were especially prominent (p = 0.007) upon the comparison of ER+ andER– breast cancer groups with BRCA1 expression levels below median (32.4 ± 5.0 % and 26.8 ± 2.9 %, respectively). 5. Comparisonof BRCA1 expression levels in ER– breast tumors and the median for all studied breast cancer samples (37 %) demonstrated the correlationof decreased level of BRCA1 expression and negative ER status of the tumor. BRCA1 expression levels below the median wereshown for 80 % of breast cancer patients with negative ER status in tumor, and over the median – in 2 0 % of cases, respectively.Conclusion. The results of current studies demonstrated that BRCA1 protein is expressed at different levels in the tumor tissue of allbreast cancer patients. Lower level of BRCA1 expression in ER-negative as compared to ER-positive tumors, and established unfavorableprognostic value of ER-negative breast cancer status point to poor prognostic value of lower level of BRCA1 expression.Key words: BRCA1, estrogen receptors, breast cancer, flow cytometry, prognosis
Добавил в систему: Шестакова Елена Анатольевна

	ИСТИНА	Войти в систему Регистрация
	ИСТИНА ПсковГУ
	Главная Поиск Статистика О проекте Помощь

ИСТИНА

ИСТИНА ПсковГУ

Прикрепленные файлы