|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ПсковГУ |
||
Генетически кодируемый биосенсор roKate для регистрации редокс-состояния пула глутатионастатья
Дата последнего поиска статьи во внешних источниках: 28 февраля 2020 г.
- Авторы: Шохина А.Г., Белоусов В.В., Билан Д.С.
- Журнал: Вестник Российского государственного медицинского университета
- Том: 2019
- Номер: 1
- Год издания: 2019
- Издательство: РНИМУ им. Н. И. Пирогова
- Местоположение издательства: Москва
- Первая страница: 94
- Последняя страница: 101
- DOI: 10.24075/vrgmu.2019.013
- Аннотация: Генетически кодируемые биосенсоры на основе флуоресцентных белков представляют собой инструмент исследования ряда биологических процессов в живых системах в режиме реального времени. За последние годы было создано целое семейство биосенсоров, позволяющих визуализировать в живых клетках изменения редокс-состояния пула глутатиона. Целью настоящей работы была разработка нового биосенсора для регистрации соотношения 2GSH/GSSG на основе красного флуоресцентного белка mKate2. Для этого методом направленного мутагенеза в структуру флуоресцентного белка вносили пару аминокислотных остатков цистеина, которые при окислении окружающего пула глутатиона формируют дисульфидную связь, что приводит к изменению спектральных характеристик. Полученный биосенсор был протестирован in vitro на выделенном препарате белка, в частности, были исследованы спектральные характеристики, рН-чувствительность белка, окислительно-восстановительный потенциал. Кроме того, биосенсор, названный roKate, был протестирован в культуре живых клеток млекопитающих. Он отличается высокой яркостью и повышенной стабильностью сигнала при изменениях рН в физиологическом диапазоне. От других представителей данного семейства биосенсоров roKate отличается необратимым изменением сигнала при окислении в клетках млекопитающих. Применение данного сенсора предпочтительно в экспериментах с наличием длительного промежутка времени между воздействием на биологическую систему и последующим анализом вызванного эффекта, например в условиях длительной пробоподготовки.
- Добавил в систему: Билан Дмитрий Сергеевич