Аннотация:Фермент простагландин-H-синтаза (PGHS; К.Ф.1.14.99.1) осуществляет синтез простагландинов из арахидоновой кислоты. Простагландины являются медиаторами, ответственными за важные физиологические процессы: свёртывание крови, репродуктивные функции, работа желудочно-кишечного тракта, реакции иммунного ответа и др.
PGHS катализирует две последовательные реакции: циклооксигеназную, в ходе которой арахидоновая кислота окисляется двумя молекулами кислорода и превращается в простагландин G2 (PGG2), и пероксидазную, в результате которой PGG2 преобразуется в PGH2 в присутствии донора электронов. В ходе обеих реакций фермент подвергается необратимой инактивации.
Катализ обеих реакций способна проводить только холоформа PGHS (комплекс белка с кофактором гемом). В предыдущих работах определяли только равновесную константу диссоциации комплекса, причём оценивали её значение только косвенным путём, поэтому эти значения расходились на 1-2 порядка. Индивидуальные константы скорости реакций процесса комплексообразования не определялись.
В настоящем исследовании кинетику ассоциации и диссоциации холоформы PGHS изучали с использованием апоформы фермента, полученной методом восстановления гемового железа дитионитом натрия в анаэробных условиях и дальнейшего окисления системы кислородом. Концентрацию холоформы PGHS детектировали по скорости циклооксигеназной реакции в различных условиях. Для простейшей модели найдены значения константы скорости присоединения гема к апоферменту (3*105 М-1*сек-1) и константы скорости отщепления гема от холофермента (3,9*10-3 сек-1). Соответственно, равновесная константа диссоциации составляет 1,3*10-8 М при 25°C.
