ИСТИНА

Исследование роли моторных белков актиновых микрофиламентов и микротрубочек цитоскелета нейронов, а также возможности «кометоподобного» радиального транспорта холинорецепторов актиновыми микрофиламентами без участия миозиновых моторов в период депрессии вызванного ацетилхолином тока командных нейронов оборонительного поведения виноградной улитки на клеточном аналоге привыкания. Работа проведена на идентифицированных командных нейронах оборонительного поведения наземного моллюска виноградной улитки. В ходе выполнения проекта для решения поставленных задач использовали ингибиторный анализ в электрофизиологических экспериментах и математическое моделирование.

Исследовали вклад моторных белков цитоскелета в клеточный механизм депрессии вызванного ацетилхолином входящего хлорного тока (АХ-тока) командных нейронов оборонительного поведения виноградной улитки при стимуляции, имитирующей выработку поведенческого привыкания. Обнаружено: 1) блокаторы киназы легких цепей миозина (ML-7 и MLCK-IP-18) ослабляли депрессию тока, а ингибитор немышечного миозина II (блеббистатин) и ингибитор киназ ROCK-I и ROCK-II, которые активируют, преимущественно, немышечный миозин II, (Y27632) не изменяли депрессию. 2) ингибитор динеинов (EHNA) снижал скорость депрессии тока. Ингибиторы кинезина Eg5 (Eg5 Inhibitor III, Eg5 Inhibitor V, trans-24) снижали степень депрессии тока, а Eg5 Inhibitor V, trans-24 подавлял еще и начальную скорость депрессии. Результаты электрофизиологических экспериментов и математическое моделирование позволяют сделать вывод об участии моторных белков цитоскелета - миозинов (исключая немышечный миозин II типа), динеинов, кинезина Eg5 в радиальном транспорте ацетилхолиновых рецепторов в командных нейронах виноградной улитки на клеточном аналоге привыкания. Полагаем, что взаимное влияние моторных белков (динеинов и кинезинов), расположенных на одной везикуле, может приводить к опосредованному участию этих молекулярных моторов в противоположных их основному направлению транспортных процессах (динеинов – в экзоцитозе, а кинезина Eg5 – в эндоцитозе). Предполагали также выяснить возможность «кометоподобного» радиального транспорта холинорецепторов актиновыми микрофиламентами без участия миозиновых моторов в период депрессии АХ-тока командных нейронов оборонительного поведения виноградной улитки на клеточном аналоге привыкания. Для этого исследовали влияния на депрессию АХ-тока трех блокаторов - СК-548, СК-636, ингибиторов комплекса актиноподобных белков Arp2/3, активация которого запускает быструю полимеризацию актина и образование «кометоподобного» хвоста у актиновой нити, а также вискостатина, ингибитора белка N-WASP, который активирует Arp2/3. Обнаружено, что СК-548 ослабляет депрессию АХ-тока. СК-636 и вискостатин необратимо усиливают депрессию этого тока и блокируют его спонтанное восстановление. Эффект СК-548 и результаты математического моделирования являются аргументами в пользу участия «кометоподобного» транспорта холинорецепторов, запускаемого белковым комплексом Arp2/3 в эндо- и экзоцитозе рецепторов в командных нейронах виноградной улитки на клеточном аналоге привыкания. Необратимое ингибирование вискостатином и СК-636 жизненно важных метаболических процессов нейрона, приводящих к снижению уровня АТФ, могло быть причиной необратимых эффектов этих блокаторов на депрессию тока.