Разработка универсального вакцинного антигена для создания вакцины широкого спектра против вируса болезни НьюкаслаНИР

A universal vaccine antigen for the development of a broad-spectrum vaccine against the Newcastle disease virus

Источник финансирования НИР

грант РНФ

Этапы НИР

# Сроки Название
1 28 мая 2025 г.-31 декабря 2025 г. Разработка универсального вакцинного антигена для создания вакцины широкого спектра против вируса болезни Ньюкасла
Результаты этапа: 1. Для создания универсального антигена как основы рекомбинантной кандидатной вакцины широкого спектра действия против вируса болезни Ньюкасла (ВБН) проведен анализ актуальных аминокислотных последовательностей поверхностного гликопротеина – гемагглютинин-нейраминидазы (HN) современных изолятов ВБН. При анализе аминокислотных последовательностей были использованы международные базы данных UniProt и GenBank. Был составлен перечень последовательностей белка HN для генотипов V, VI и VII, выделенных после 2010 года. 2. На основе анализа актуальных аминокислотных последовательностей HN белка были созданы консенсусные последовательности для изолятов ВБН генотипов V, VI и VII, выделенных после 2010 года. На основании литературных данных были выбраны фрагменты белка HN: 341-368 а.о. и 239-257 а.о., включающие ключевые линейные вирус-нейтрализующие эпитопы, которые характеризуются экспериментально подтвержденной способностью индуцировать перекрестную защиту. Аминокислотные последовательности соответствующие выбранным фрагментам были разработаны на основе консенсусной последовательности HN. Проведенный нами в 2025 году анализ литературы показал, что штаммы VII генотипа, являются основными причинами большинства вспышек болезни Ньюкасла на трех континентах (Евразия, Африка, Южная Америка) и представляют наиболее значительный риск для птицеводства (Kondakova et al., 2025), поэтому в приоритете было совпадение с консенсусной последовательностью именно VII генотипа. 3. Был выполнен дизайн аминокислотных последовательностей выбранных эпитопов HN. Спроектированы три варианта последовательностей для антигенного участка 341-368 а.о. (Ep1-Ep3), а также последовательность для эпитопа 239-257 а.о (Ep4). Эпитопы Ep1, Ep2 и Ep3 отличаются друг от друга по аминокислотам в позициях 347 и 362, при этом аминокислоты 347 и 362 были отобраны попарно в соответствии с частотой их ковариантной встречаемости среди современных штаммов генотипа VII. Эпитоп Ep4 содержит консенсусную аминокислотную последовательность VII генотипа ВБН. 4. Созданы генно-инженерные конструкции, кодирующие выбранные эпитопы Ep1, Ep2, Ep3 и Ep4. 5. Путем последовательного клонирования на основе плазмиды pUC19 получена генно-инженерная конструкция, включающая все четыре выбранных эпитопа Ep1-Ep2-Ep3-Ep4, а также аналогичная конструкция, включающая двукратный тандемный повтор комбинации выбранных эпитопов (Ep1-Ep2-Ep3-Ep4)х2 (антиген Castle1). 6. На основе вектора pQE-30 cконструирована плазмида (pQE30-Castle1) для экспрессии в бактериальной системе E.coli рекомбинантного антигена Castle1. 7. Сконструированы плазмиды на основе вектора pQE-40 для экспрессии отдельно каждого из выбранных эпитопов ВБН в бактериальной системе E.coli. Для увеличения уровня продукции рекомбинантных белков применена технология слитых белков с использованием дигидрофолатредуктазы (DHFR) в качестве белка-носителя. В результате были созданы следующие генно-инженерные конструкции: pQE-40-Ep1, pQE-40-Ep2, pQE-40-Ep3, pQE-40-Ep4 . 8. Генетические конструкции pQE-40-Ep1, pQE-40-Ep2, pQE-40-Ep3, pQE-40-Ep4 и pQE30-Castle1, кодирующие последовательности эпитопов Ep1, Ep2, Ep3, Ep4 и полиэпитопный антиген Castle1, были экспрессированы в клетках E. coli. Все белки-антигены получены в количествах достаточных для разработки и характеристики прототипа вакцины, а также для проведения экспериментов на лабораторных животных. 9. Полученные рекомбинантные белки, содержащие эпитопы Ep1, Ep2, Ep3, Ep4 и полиэпитопный антиген Castle1 были проанализированы и охарактеризованы физико-химическими методами. 10. Проведен анализ стабильности очищенных белков при хранении. Электрофоретический анализ в ДСН-ПААГ показал, что все рекомбинантные белки стабильны при различных температурах, включая процесс замораживания/оттаивания. 11. Получены структурно модифицированные сферические частицы вируса табачной мозаики (СЧ ВТМ) из очищенного препарата вируса. СЧ ВТМ получены методом термической перестройки путем нагревания препарата ВТМ с концентрацией 2 мг/мл. Всего получено 350 мг СЧ ВТМ. 12. Получены композиции рекомбинантных антигенов ВБН с СЧ ВТМ. Проведена оценка стабильности, полученные данные свидетельствуют о стабильности композиций рекомбинантный антигенов ВБН со СЧ, что является важным аспектом для разработки эффективных вакцин.
2 1 января 2026 г.-31 декабря 2026 г. Разработка универсального вакцинного антигена для создания вакцины широкого спектра против вируса болезни Ньюкасла
Результаты этапа: -

Прикрепленные к НИР результаты

Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".