ИСТИНА

В соответствии с целью очередного годичного этапа проекта на 2013 год было запланировано продолжение совместных исследований с немецкими участниками проекта, направленных на выяснение роли различных типов белок-белковых взаимодействий в регуляции жизнедеятельности клетки в нормальных условиях и при различных патологиях и, более конкретно, роли сульфатирования и фосфорилирования в регуляции белок-белковых взаимодействий. Были запланированы следующие исследования: 1. Создание и подтверждение экспериментально концепции о специфической функции сульфатирования в регуляции путей передачи клеточных сигналов (“signal transduction”) (совместно с зарубежными участниками проекта) 2. Проведение поиска амилоидогенных белков, содержащих домены, которые узнают полипролиновые фрагменты, с целью анализа участия этих белков в амилоидогенных процессах (прежде всего, связанных с нейродегенерацией).

В соответствии с целью проекта были продолжены совместные исследования с учеными Германии, направленные на выяснение роли различных типов белок-белковых взаимодействий в регуляции жизнедеятельности клетки в нормальных условиях и при различных патологиях и, более конкретно, роли сульфатирования и фосфорилирования в регуляции белок-белковых взаимодействий. Для реализации целей проекта совместно с группами профессора Фришмана (Prof. Dr. Frishman, Lehrstuhl fur genomorientierte Bioinformatik, Technische Universitat Munchen) и профессора Матиаса Манна (Prof. Dr. Matthias Mann, Prof. Facultet fur Chemie und Pharmazie, Ludwig-Maximilians-Universitat Munchen und Max-Planck-Institut fur Biochemie) с помощью методов биоинформатики был проведен сравнительный анализ роли сульфатирования и фосфорилирования в регуляции белок-белковых взаимодействий, а также исследовано значение указанных пост-трансляционных модификаций в регуляции путей передачи сигналов. В частности, был проведен сравнительный анализ белков, подвергающихся сульфатированию или/и фосфорилированию, с целью выяснения функции двух сходных типов пост-трансляционной модификации в регуляции путей передачи сигналов. Были получены результаты, подтверждающие предложенную нами концепцию, согласно которой сульфатирование белков происходит в тех случаях, когда необходимо образование прочных (необратимых) белок-белковых комплексов, тогда как фосфорилирование-дефосфорилирование белков вовлечено в регуляцию обратимых процессов. Это предположение было подтверждено также экспериментально при определении прочности взаимодействия белков с полимерами, содержащими сульфо- или фосфогруппы. С помощью метода изотермической калориметрии было показано, что как энтальпия, так и константа связывания полистиролсульфонатов с нативным модельным белком существенно выше, чем в случае полифосфатов. С помощью метода дифференциальной сканирующей калориметрии была также доказано, что повышенное сродство полистиролсульфонатов сохраняется и при их связывании с денатурированными белками. Зарубежными участниками проекта был проведен анализ баз данных и выявлены сайты сульфатирования в неупорядоченных структурах ряда белков, а также начата подготовка к изучению сульфопротеома, в том числе для изучения возможности сульфатирования амилоидогенных белков. Были продолжены экспериментальные исследования некоторых белков, являющихся потенциальными мишенями для сульфатирования (прионов и спермоспецифических белков), а также проведена разработка методов изучения их взаимодействий с белками-партнерами в нативном и модифицированном состоянии. Для изучения возможного участия сульфатирования в регуляции взаимодействий полипролиновых доменов белков (в том числе, и амилоидогенных) с другими белками был проведен анализ литературных данных, касающихся доменов, способных узнавать различные полипролиновые последовательности. По результатам проекта опубликовано 7 статей в зарубежных (6) и в отечественных (1) журналах. Защищены 2 кандидатские диссертации и несколько дипломных работ.