ИСТИНА

С использованием иммуногенов различной структуры получены и охарактеризованы поликлональные антисыворотки, специфичные к хлорамфениколу. Показано, что при использовании иммуногена, синтезированного из сукцината хлорамфеникола, были получены более высокоаффинные антитела, чем против иммуногена, полученного из диазопроизводного антибиотика (значения среднечисловых констант диссоциации комплекса хлорамфеникола с антителами в растворе составили 5.6х10"9 и 5.4х10"8 М, соответственно). Синтезированы различные по структуре и составу конъюгаты хлорамфеникола с овальбумином для сорбции на твердой фазе и изучено влияние их структуры и состава на чувствительность и специфичность твердофазного ИФА хлорамфеникола. Показано, что конъюгат хлорамфеникола с овальбумином, синтезированный из сукцината хлорамфеникола (соотношение белок: антибиотик - 1:5) является оптимальным по составу и обеспечивает достижение наиболее высокой чувствительности анализа. При этом антисыворотки, полученные против иммуногена, синтезированного из сукцината хлорамфеникола, обладали специфичностью лишь по отношению к конъюгатам хлорамфеникола с овальбумином, гомологичным иммуногену по структуре, тогда как антисыворотки, полученные против иммуногена, синтезированного из диазопроизводного хлорамфеникола, - как гомо-, так и гетерологичным. Разработан и оптимизирован метод твердофазного ИФА для количественного определения хлорамфеникола в сыворотке крови человека и определены его аналитические характеристики. Метод позволяет определять антибиотик в линейном диапазоне 15-500 нг/мл в сыворотке крови, разведенной в 100 раз. Проведена корреляция результатов определения концентрации хлорамфеникола в сыворотке крови больных людей методами ИФА и высокоэффективного капиллярного электрофореза. Коэффициент корреляции составил 0.973. Проведено изучение влияния матрикса различных образцов на результаты твердофазного ИФА хлорамфеникола. Подобраны и оптимизированы условия проведения иммуноферментного анализа остаточных количеств антибиотика в продуктах питания животного происхождения (молоке, мясе, яйцах); определены аналитические характеристики метода. Предел обнаружения составляет 0.08 нг/мл хлорамфеникола в молоке или экстракте мяса (яиц), разведенном в 100 раз. Корреляционными испытаниями с методом ВЭЖХ(коэффициент корреляции 0.975) подтверждено, что разработанный метод позволяет надежно определять хлорамфеникол в концентрациях, соответствующих ПДУ. С использованием иммуногенов, синтезированных двумя различными способами, получены и охарактеризованы поликлональные антисыворотки против гентамицина. Разработана и оптимизирована иммуноферментная тест-система для количественного определения гентамицина в сыворотке крови и выпущена опытная партия наборов реагентов в ЗАО "НПП Иммунотех". Линейный диапазон определяемых концентраций составляет 0.5-15 нг/мл гентамицина в сыворотке, разведенной в 1000 раз. Коэффициент корреляции результатов определения гентамицина в сыворотке крови с помощью разработанного метода твердофазного ИФА и поляризационного флуороиммуноанализа составил 0.943.