Аннотация:Ген MCTS2P (malignant T-cell-amplified sequence 2 pseudogene) — транскрипционно активный ретроген, произошедший от своего паралога MCTS1. Аминокислотная последовательность белка MCTS2P на 95% идентична последовательности MCTS1. MCTS1 и DENR (density regulated re-initiation and release factor) формируют гетеродимер, который предположительно является функциональным аналогом эукариотического фактора инициации eIF2D: эти белки способны участвовать в неканонической инициации трансляции, осуществлять разборку пост-терминационного комплекса 40S-тРНК-мРНК и влиять на эффективность реинициации трансляции [1]. Существует две изоформы MCTS1: MCTS1a и MCTS1b, которые появляются в результате альтернативного сплайсинга мРНК этого гена и различаются небольшим участком на N-конце.
MCTS1 является онкогеном, способствующим прогрессии нескольких видов рака. Например, в случае с раком молочной железы сверхэкспрессия MCTS1 активирует продукцию IL-6, что способствует ангиогенезу и избавлению опухоли от иммунного надзора [2]. При развитии гепатоцеллюлярной карциномы человека дерегуляция MCTS1 усиливает Yap-опосредованную пролиферацию клеток [3]. Основываясь на гомологии с MCTS1, мы предполагаем, что MCTS2P также может обладать онкогенным потенциалом.
Мы планируем получить три молекулярно-генетических конструкции на основе лентивирусного вектора pLeGO-iScar-Puro, кодирующих MCTS1a, MCTS1b или MCTS2P и несущих ген флуоресцентного белка mScarlet в качестве маркера. Затем клетки-упаковщики будут трансфицированы полученными плазмидами, мы соберём наработанные вирусные частицы, и трансдуцируем ими линию раковых клеток B16. Полученные клеточные популяции будут нести встроенную в геном конструкцию, сверхэкспрессирующую изучаемые гены. Эти линии клеток мы планируем прививать “голым” мышам (nude mice, линия мышей с подавленной иммунной системой) и вести наблюдение за развитием у них злокачественных новообразований.