Аннотация:В настоящее время даже в высокоразвитых странах наблюдается увеличение количества заболеваний, вызванных стрептококками. Этот факт связан с появлением бактериальных штаммов, резистентных к антибиотикам. Бактериофаги, вирусы бактерий, и их литические ферменты можно рассматривать как потенциальную альтернативу антибиотикотерапии. В семидесятых годах прошлого века был выделен фермент, продуцируемый бактериофагом С1 при заражении им клеток стрептококка. В литературе он встречается под именем PlyC. Фермент (PlyC) гидролизует ковалентные связи петидогликанового остова стенок клеток стрептококков групп А и С, вызывая их гибель, и может рассматриваться как перспективный антибактериальный агент.
Ограничением, препятствующим использованию данного фермента в медицине, является его низкая стабильность в условиях хранения (комнатная температура). При 25°С PlyC инактивируется по первому порядку, полностью теряя активность в течение 9 дней.
Целью настоящей работы являлся подбор стабилизирующих агентов для данного фермента. К эксперименту по стабилизации и конечному препарату были предъявлены следующие требования: простота методик, нетоксичность и биоразлагаемость стабилизирующих реагентов, удобная форма использования.
К стабилизации PlyC были применены два подхода: гликозилирование аминогрупп молекулы фермента олигосахаридами с различной длиной цепи и образование комплексов с полиэлектролитами и незаряженными полимерами различных молекулярных масс.
На основании проделанной работы можно сделать следующие выводы:
1. При гликозилировании аминогрупп молекулы фермента стабилизирующий эффект зависит от длины цепи модифицирующего агента. Установлено, что мальтотриоза, содержащая 3 остатка глюкозы, является более эффективным стабилизатором, чем декстрины, в состав молекул которых входит 5, 7, 10 остатков глюкозы.
2. Стабилизация путем образования комплексов с декстранами выявила тот факт, что стабилизационный эффект зависит от молекулярной массы полимера и молярного отношения декстран/фермент. Увеличение стабильности на порядок было обнаружено при использовании декстрана с молекулярной массой 40 кДа при молярном отношении реагент/фермент, равном 4.
3. При стабилизации полиэлектролитами (декстрансульфатами) установлено, что стабилизирующий эффект зависит только от числа отрицательных зарядов полииона, приходящихся на молекулу фермента