|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ИСТИНА ПсковГУ |
||
Повышение термостабильности оксидазы D аминокислот из дрожжей Trigonopsis variabilis методом направленного мутагенезадипломная работа (Специалист)
- Научные руководители: Тишков В.И., Комарова Н.В.
- Автор: Голубев Игорь Владимирович
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2011
- Аннотация: 1. Проведен анализ структуры оксидазы D-аминокислот из T.variabilis в области связывания рибозы аденозина FAD, выбраны аминокислотные остатки для мутаций, и методом направленного мутагенеза получены мутантные TvDAAO с заменами Phe33Asp, Glu32Gln / Phe33Asp и Glu32Arg/Phe33Asp.Замена Phe33Asp привела к получению активного фермента в нерастворимой форме. 2. Изучен спектр субстратной специфичности, определены кинетические параметры с различными D-аминокислотами для мутантных TvDAAO Phe33Asp, Glu32Gln/Phe33Asp , Glu32Arg/Phe33Asp и wt-TvDAAO. Показано, что у двойных мутантов незначительно изменился профиль субстратной специфичности, однако с рядом D аминокислот, в частности, с D-метионином, наблюдается улучшение кинетических параметров. 3. Изучена температурная стабильность полученных мутантных TvDAAO. Установлено, что введение замены Phe33Asp приводит с сильной дестабилизации белковой глобулы. Введение дополнительной замены в 32е положение приводит к стабилизации, причем мутантная TvDAAO Glu32Arg/Phe33Asp термостабильнее wt DAAO более чем в 2 раза. Показано, что, как и в случае фермента дикого типа, температурная инактивация TvDAAO Glu32Gln/Phe33Asp и Glu32Arg/Phe33DAsp протекает по диссоциативному механизму.
- Добавил в систему: Тишков Владимир Иванович