Описание:Цель реализации программы – дать обучающемуся теоретическую подготовку и практические навыки редактирования генома клеточных линий млекопитающих и лабораторных мышей.
При прохождении программы осваивается полный цикл работ по получению клеточных линий млекопитающих с отредактированным геномом, включая планирование эксперимента, дизайн и клонирование необходимых генетических конструкций, работа с клеточными культурами и введение векторов для редактирования генома, отбор и анализ полученных линий. Кроме того, обучающиеся получат базовые теоретические представления об основных приёмах и методиках получения линий трансгенных мышей.
В результате успешного прохождения программы обучающийся:
1) должен знать:
- цели, подходы и методы геномного редактирования клеточных линий млекопитающих;
- теоретические основы геномного редактирования лабораторных мышей;
- принципы дизайна экспериментов по геномному редактированию клеточных линий и мышей, включая выбор мишеней, создание генетических конструкций и методы валидации.
2) должен уметь:
- выбирать стратегию геномного редактирования в зависимости от поставленной экспериментальной задачи, включая выбор системы редактирования, выбор модельного организма, выбор генетического вектора, дизайн гидовых РНК (при необходимости матриц для гомологичной рекомбинации), выбор способов оценки результатов редактирования;
- проводить дизайн генетических конструкций для геномного редактирования клеточных линий млекопитающих и лабораторных мышей в случае каждого из подходов: система CRISPR/Cas9, лентивирусные частицы, транспозоны;
- создавать плазмидные векторы для геномного редактирования с использованием стандартных методов молекулярного клонирования;
- создавать клеточные линии с отредактированным геномом;
- проводить отбор моноклональных линий;
- получать лентивирусные частицы и осуществлять трансдукцию;
- проводить генотипирование клеточных линий с отредактированным геномом, интерпретировать данные генотипирования;
- анализировать фенотип полученных линий методами ОТ-кПЦР, вестерн блоттинга, проточной цитофлуориметрии, микроскопии.
В результате обучения приобретается компетенция инженера-редактора генома клеток млекопитающих.