ИСТИНА

Последним этапом трансляционного цикла является рибосомный рециклинг, в ходе которого происходит отсоединение большой рибосомной субчастицы, диссоциация тРНК и уход малой субчастицы из комплекса с мРНК. Эукариотические мРНК в основном моноцистронны, и 40S-субчастица обычно диссоциирует после прочтения длинных рамок считывания. Однако после коротких рамок, которые встречаются в 5’- нетранслируемых областях некоторых мРНК (uORF), она может оставаться на мРНК и реинициировать трансляцию. Эти процессы регулируют белок eIF2D (Tma64p у дрожжей) и гетеродимер MCTS1·DENR (Tma20p·Tma22p у дрожжей) [1,2]. Данные белки имеют в своём составе консервативный SUI1-домен, который связывается с Pсайтом рибосомы и, вероятно, обеспечивает вытеснение деацилированной тРНК при рециклинге [3,4]. Интересно, что SUI1-домен есть также в факторе инициации трансляции eIF1, который тоже оперирует с тРНК в Pсайте 40S-субчастицы, но на другой стадии трансляционного цикла, обеспечивая распознавание правильного стартового кодона и препятствуя узнаванию неправильных (не-AUG) кодонов. В данной работе с помощью репортерных конструкций мы измеряли частоту реинициации трансляции после короткой uORF и после длинной белок-кодирующей рамки в клетках пекарских дрожжей Saccharomyces cerevisiae, содержащих различные аминокислотные замены или делеции в функционально важных участках фактора Tma22p. Кроме того, был проведён анализ активности химерного белка, состоящего из N-концевого домена Tma22p и SUI1-домена Sui1p (фактора инициации eIF1 дрожжей). Мы также оценили влияние на реинициацию одиночных и комбинированных (двойных и тройных) нокаутов по генам TMA20, TMA22 и TMA64. 253 Полученные результаты свидетельствуют о важности консервативной положительно заряженной β-петли в SUI1-домене Tma22p и о большем вкладе гетеродимера Tma20p·Tma22p, чем фактора Tma64p, в реинициацию трансляции после коротких uORF. Кроме того, хотя делеция гена TMA22 мало влияет на скорость роста дрожжей, появление в клетке химерного белка Tma22-Sui1 приводит к их нежизнеспособности. Эти данные позволяют выявить сходства и различия в молекулярных механизмах функционирования структурного домена SUI1 в белковых факторах, регулирующих связывание тРНК в P-сайте на разных стадиях трансляционного цикла.