ИСТИНА

Открытые рамки считывания (uORF) в 5′-UTR (нетранслируемой области) мРНК представляют собой важные элементы генома, способные модулировать трансляцию кодирующей последовательности (CDS) путём контроля инициации или кодировать функциональные микропептиды. В ходе полногеномного CRISPR/Cas-скрининга uORF было установлено влияние uORF в 5′-UTR мРНК PEX26 на пролиферацию клеточной линии человека HAP1. Данные рибосомного профилирования свидетельствуют о наличии трёх uORF в 5′-UTR основной изоформы мРНК PEX26. Мутации в 5′-UTR, затрагивающие эти uORF, приводили к более выраженному снижению пролиферации по сравнению с мутациями в CDS, внесенными с помощью CRISPR/Cas9. Данный факт позволяет предположить, что uORF кодирует функциональный микропептид. Для уточнения вклада отдельных вариантов выполнено высокопроизводительное секвенирование, позволившее определить спектр мутаций и выделить изменения, ассоциированные с наибольшим эффектом на пролиферацию клеток. Роль uORF в регуляции трансляции CDS оценивали в системе двойного люциферазного репортёра путём замены стартовых кодонов uORF на неинициирующие, что позволяло количественно оценить влияние отдельных uORF на трансляцию CDS. Показано, что uORF3, расположенная проксимально к CDS, оказывает выраженное ингибирующее действие на трансляцию, тогда как uORF1, локализованная ближе к 5′ концу, напротив, стимулирует трансляцию CDS. uORF2, расположенная между ними, не оказывает выраженного влияния на трансляцию. Дополнительно установлено, что при альтернативном сплайсинге возможна изоформа со слиянием uORF1 и uORF3. Объединённая uORF демонстрирует ингибирующее действие на трансляцию CDS, указывая на сплайсинг зависимую перестройку трансляционного контроля. В совокупности полученные результаты указывают на функциональную значимость uORF в 5′-UTR мРНК PEX26, проявляющуюся как в регуляции трансляции основной кодирующей последовательности, так и в продукции потенциального микропептида, обладающего независимой биологической активностью. Учитывая связь PEX26 с патологическими фенотипами, полученные результаты могут представлять интерес не только с фундаментальной, но и с медицинской точки зрения.