ИСТИНА

Количество АТФ в клетке дрожжей и ее компартментах является одним из важнейших биоэнергетических параметров, который непросто экспериментально оценить. Отдельную проблему представляет разделение митохондриального и цитоплазматического пулов АТФ и оценка уровня АТФ в матриксе интактных митохондрий. Для решения этой проблемы мы воспользовались флуоресцентными белковыми зондами семейства yATeam, которые связывают АТФ, меняя при этом свои спектральные свойства, и оптимизированы для клеток дрожжей Saccharomyces cerevisiae. В работе применялось четыре вида зондов: АТФ-связывающие «рабочие» и не связывающие АТФ «контрольные» зонды с митохондриальной либо цитоплазматической локализацией. Регистрируя флуоресценцию yATeam в матриксе изолированных митохондрий, мы количественно откалибровали сигнал зонда и впервые измерили скорость накопления АТФ в матриксе при окислении сукцината. Кроме того, нам удалось в реальном времени наблюдать за уровнем АТФ в цитоплазме живых дрожжей в зависимости от добавления субстратов и ингибиторов гликолиза или окислительного фосфорилирования, а также разобщителей мембранного протонного градиента. Пользуясь новым подходом, мы сравнили динамику уровня АТФ в дрожжах дикого типа с мутантными штаммами с нарушенным ингибированием АТФазной активности F-АТФазы. Работа выполнена при финансовой поддержке Российского научного фонда (грант 20-14-00268).