ИСТИНА

Введение. Нарушение гомеостаза цинка вызывает снижение нейротропной активности и развитие дегенеративных процессов в сетчатке. Мишенью мобильного цинка являются нейротропные факторы сетчатки (НФС), действие которых блокируется за счет образования олигомерных структур. Работа посвящена разработке и испытанию терапевтических форм НФС, лишенных чувствительности к ионам цинка. Методы. Координаторы цинка предсказаны в трехмерной структуре НФС in silico с применением инструментов на базе искусственного интеллекта. Му-тантные формы НФС с заменами координирующих аминокислотных остатков получены методами сайт-направленного мутагенеза, экспрессии в бактериальной системе и выделения с помощью высокоэффективной хроматографии. Термостабильность, цинксвязывающие свойства и четвертичная структура модифицированных НФС охарактеризованы методами дифференциальной сканирующей флуориметрии и динамического рассеивания света. Результаты. НФС способны связывать ионы цинка в микромолярным диапазоне концентраций, что приводит к снижению температуры плавления и увеличению гидродинамического радиуса соответствующих белковых форм. Модифицированные варианты НФС с заменами предсказанных остатков теряют способность координировать цинк, а их термостабильность и четвертичная структура становятся нечувствительными к присутствию этого металла. Выводы. Получены модифицированные формы НФС, лишенные чувствительности к ионам цинка. Указанные формы могут рассматриваться в качестве перспективных терапевтических агентов при нейродегенеративных заболеваниях сетчатки, способных эффективно компенсировать нейротропную активность в условиях цинкового стресса.