ИСТИНА

Нейродегенерация при глаукоме связана с подавлением нейротропной активности за счет эффектов мобильного цинка. Мишенью является фактор пигментного эпителия сетчатки (PEDF), действие которого блокируется за счет связывания цинка и образования димерных и тримерных структур, что приводит к маскированию рецептор-связывающих участков белка. Настоящая работа посвящена конструированию и испытанию модифицированных форм PEDF, лишенных чувствительности к ионам цинка, с целью их последующего использования для компенсации нейротропной активности в сетчатке. Методами молекулярного клонирования и сайт-направленного мутагенеза созданы генетические конструкции для экспрессии мутантов PEDF с заменами остатков гистидина, критичных для координации цинка. Экспрессия в бактериальной системе и выделение из бактериальных лизатов с применением аффинной и ионообменной хроматографии позволили получить гомогенные препараты мутантных белков. Методами дифференциальной сканирующей флуориметрии и динамического рассеивания света охарактеризованы их цинк-связывающие свойства и четвертичная структура. Показано, что введенные замены частично или полностью подавляют способность PEDF связывать ионы цинка. При этом мутант, полностью лишенный чувствительности к цинку, теряет склонность к патологической олигомеризации. Полученные формы PEDF являются перспективными кандидатами для терапии, поскольку будут сохранять нейротропную активность в условиях глаукомной нейропатии.