ИСТИНА

Гетероплазмия – это состояние, когда в одной эукариотической клетке присутствует несколько вариантов мтДНК, которые могут отличаться как отдельным нуклеотидами, так и иметь обширные делеции. Имеются сведения о существовании порога патогенности мутантной мтДНК, то есть патогенные варианты мтДНК могут сохраняться в клетке, не оказывая какого-либо влияния на её фенотип. Обычно за счёт случайного дрейфа генов через несколько поколений отдельные клетки переходят в состояние гомоплазмии, сохранив только один вариант мтДНК. Однако для некоторых организмов описаны случаи стабильной гетероплазмии, сохраняющейся в течение многих поколений. Ранее мы показали возможность поддерживать мтДНК с обширной делецией HS rho– в состоянии митохондриальной гетероплазмии по крайней мере на протяжении 20 поколений. В данной работе мы производили количественную оценку уровня гетероплазмии. Для этого был использован метод на основе ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ). Так как участок, соответствующий стыку делеции rho– варианта мтДНК, представлен АТ-богатой областью с низкой сложностью, то непосредственное определение количества мтДНК с делецией в образце затруднено. Поэтому нами были использованы две пары праймеров. Первая пара специфична к участку мтДНК, сохранившемуся в rho– штамме, что позволяет проводить оценку суммарного количества обоих вариантов мтДНК в образце. Вторая пара праймеров специфична к участку rho+ варианта мтДНК, который отсутствует в rho– штамме, что позволяет проводить оценку количества мтДНК дикого типа в образце. Далее мы применили эти пары праймеров для косвенной оценки количества rho– мтДНК в клетке для определения порога патогенности мтДНК. Для этого мы провели скрещивание rho+×rho– , отобрали среди диплоидов первого поколения клоны способные расти на среде с глицерином, как единственным источником углерода. Используя ПЦР-РВ, мы оценили количество копий двух вариантов мтДНК на клетку. Мы показали, что уровень митохондриальной гетероплазмии может доходить до 80% без потери клетками способности расти на несбраживаемом источнике углерода. Работа выполнена при поддержке гранта РНФ 22-14-00108-П.