ИСТИНА

Разработаны научные подходы и предложена методология для создания универсальных биолюминесцентных тест-систем на основе рекомбинантной люциферазы светляка Luciola mingrelica с использованием библиотеки мутантов с измененными физико-химическими характеристиками. Биолюминесцентные тест-системы на основе живых прокариотических и эукариотических клеток, продуцирующих термостабильную люциферазу светляков приобретают все большую популярность благодаря их высокой чувствительности и быстроте проведения анализа. Метод незаменим для быстрой оценки цитотоксичности и скрининга лекарственных препаратов. Два биолюминесцентных внутриклеточных индикатора – низкомолекулярный АТР, мгновенно реагирующий на внешние воздействия, и высокомолекулярная термостабильная люцифераза светляка использованы для изучения клеточного ответа во времени уже на начальной стадии действия эффектора. Анализ кинетики изменения внутриклеточного и внеклеточного АТР и люциферазы уже через 2-4 ч позволяет выявлять изменения проницаемости клеточной мембраны, системы синтеза АТР и функционирования рибосом. Это удобный инструмент для изучения механизмов адаптации, выживания и гибели клеток и органелл в присутствии внешних эффекторов физикохимической природы (температура, лекарственные препараты, мембраноактивные соединения и др.), для изучения эффективности и механизма действия лекарственных средств, композиций и лекарственных форм, а также определения МИК. Приведены примеры количественного определения живых клеток, в том числе некультивируемых и медленнорастущих, по содержанию внутриклеточного АТР; специфического выявления патогенов методом биолюминесцентного иммуноанализа; определения эффективности м механизма действия антибиотиков разных классов и их композиций с матрицами неорганической природы на живые системы. Работа выполнена в рамках государственного задания МГУ имени М.В. Ломоносова (тема № 121041500039-8).