ИСТИНА

Инсулиноподобные факторы роста (IGF)– ключевые регуляторы клеточной миграции, пролиферации и дифференцировки, оказывающие кардиопротекторное действие. Основной механизм, регулирующий биодоступность IGF, – образование комплекса IGF с IGF-связывающими белками (IGFBP), а также расщепление последних специфичными протеазами с высвобождением IGF. Так, IGFBP‑4, который связывает IGF, расщепляется протеазой PAPP-A с образованием протеолитических фрагментов NT-IGFBP и CT-IGFBP‑4. Подобный механизм может активироваться в ответ на стрессовые воздействия, поэтому целью работы было изучение влияния теплового стресса на PAPP-A-специфичный протеолиз IGFBP‑4 в кардиомиоцитах человека, используя рекомбинантный NT-IGFBP‑4 в качестве стандарта. Экспрессию NT-IGFBP‑4 осуществляли в штамме E. coli Rosetta2(DE3) pLysS. Очистку целевого белка проводили методом аффинной хроматографии с применением антител IBP180, специфичных к IGFBP‑4. Иммунохимическую активность NT-IGFBP‑4 определяли с помощью ФИА «сэндвич»-типа с использованием пары антител IBP17-IBP180Eu3+. Культуру кардиомиоцитов человека, дифференцированных из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (КМ-ИПСК), характеризовали методом иммуноцитохимического окрашивания. Тепловой стресс моделировали, инкубируя КМ-ИПСК при 42 °C в течение 1 часа. Концентрацию NT-IGFBP‑4 в кондиционированной среде КМ-ИПСК оценивали методом ФИА «сэндвич»-типа с использованием пары антител IBP3-IBP180Eu3+, специфичной к неоэпитопу, образующемуся при PAPP-A-зависимом расщеплении IGFBP‑4. В результате очистки получили 0,2 мг иммунохимически активного NT-IGFBP‑4. При моделировании теплового стресса содержание белка теплового шока HspB5 в КМ-ИПСК увеличивалось в 1,6 раза. При тепловом стрессе уровень PAPP-A-специфичного протеолиза IGFBP‑4 в КМ-ИПСК возрастал в 1,5 раза. При моделировании теплового стресса в КМ-ИПСК, уровень PAPP-A-специфичного протеолиза возрастает в 1,5 раза, что может указывать на активацию высвобождения IGF при тепловом стрессе.