ИСТИНА

Белок человека Ku, состоящий из субъединиц Ku70 и Ku80, выполняет в клетке множество функций, главной из которых является участие в репарации двуцепочечных разрывов в ДНК по механизму негомологичного соединения концов. Описано также участие Ku в регуляции репликации, транскрипции и трансляции, поддержании целостности теломер и ряде других клеточных процессов. Помимо этого обнаружено, что клеточный белок Ku важен для успешной репликации ВИЧ-1. Механизм, по которому Ku стимулирует развитие вируса, пока непонятен. Существует две основные гипотезы: 1) Ku влияет на транскрипцию с интегрированной в геном клетки вирусной ДНК и 2) Ku способствует успешной интеграции, взаимодействуя с интегразой ВИЧ-1 и защищая ее от протеасомной деградации. В литературе существуют данные, как подтверждающие, так и опровергающие каждую из этих гипотез. С использованием двух разных репортерных систем мы проверили, как влияет на транскрипцию и интеграцию изменение уровня каждой из субъединиц Ku в клетке. Первая система представляет собой вектор, кодирующий люциферазу под контролем промотора ВИЧ-1. Экспрессия люциферазы в этой системе активировалась при понижении уровня Ku70 и повышении уровня Ku80; отметим, что экспрессия люциферазы под контролем промотора цитомегаловируса не зависела от уровня Ku70 или Ku80. Учитывая, что снижение уровня Ku70 с помощью siRNA приводит к частичному повышению концентрации несвязанного Ku80, мы сделали вывод, что транскрипция с промотора ВИЧ-1 активируется при повышении уровня свободного Ku80 в клетке. Проверка влияния Ku на интеграцию проводилась с использованием VSV-псевдотипированного репликативно-некомпетентного вектора на основе ВИЧ-1, в котором ген люциферазы находится под контролем промотора цитомегаловируса и эффективность ее экспрессии коррелирует с уровнем интеграции ее гена в геном клетки. Оказалось, что эффективность интеграции существенно снижается при уменьшении концентрации Ku70. Мы подробно изучили взаимодействие Ku70 с интегразой ВИЧ-1 и выявили основной сайт связывания этих белков, мутации в котором препятствуют связыванию.