ИСТИНА

Роль рецепторов к конечным продуктам гликирования (RAGE) изучается, главным образом, в контексте нарушений гомеостаза при диабете. Известно, что RAGE является полилигандным рецептором, взаимодействующим с продуктами деградации клеток и внеклеточного матрикса, а также может выполнять ко-рецепторную функцию, связывая и облегчая распознавание агонистов других рецепторов. RAGE экспрессируется клетками различных тканей, в том числе, наиболее многочисленной популяцией лейкоцитов - нейтрофилами, что обеспечивает этому белку важную роль в регуляции адаптивного иммунитета. Целью исследование было зучение вовлеченности RAGE-опосредованных механизмов в активацию нейтрофилов человека при их взаимодействии с бактериями и молекулярными паттернами воспаления - экстраклеточными фрагментами ДНК. Исследования проводились на нейтрофилах, выделяемых из периферической крови здоровых доноров (процедура получения биоматериалов одобрена Комитетом по биоэтике МГУ им. М.В. Ломоносова). В экспериментальной модели взаимодействия нейтрофилов с бактериями Salmonella typhimurium и под действием синтетических олигонуклеотидов, содержащих характерные для прокариотического генома CpG-динуклеотидные повторы с неметилированным цитозином (CpG-ОДН), детектировали изменения продукции активных форм кислорода (АФК) и оксида азота (NO) с помощью флуоресцентных зондов Carboxy-H2DCF-DA и DAF2-DA. Также была исследована жизнеспособность нейтрофилов (оценивали сопутствующие апоптозу фрагментацию ДНК, нарушение целостности клеточных мембран и экстернализацию фосфатидилсерина). Активность транскрипции белка RAGE оценивали методом ПЦР с обратной транскрипцией. Для блокирования RAGE-опосредованного сигналинга использовали коммерческий ингибитор FPS-ZM1. Показано, что при взаимодействии нейтрофилов с бактериями S. typhimurium, а также под действием CpG-ОДН увеличивается транскрипция рецептора RAGE. Образование активных форм кислорода и азота нейтрофилами, взаимодействующими с бактериями, важно для реализации их микробицидной функции. Однако устойчивое повышение активности синтазы оксида азота может оказывать провоспалительный эффект, а избыточное накопление АФК – способствовать повреждению собственных тканей. Было обнаружено, что ингибирование RAGE подавляет образование NO и АФК, которые были детектированы при взаимодействии нейтрофилов с патогеном S. typhimurium и синтетическими олигонуклеотидами, имитирующими продукты бактериальной деградации. Важным критерием эффективной лейкоцитарной защиты и своевременного разрешения воспаления является продолжительность жизни нейтрофилов. Блокирование RAGE-опосредованных путей активации подавляет проапоптотический эффект CpG-ОДН. Полученные нами результаты свидетельствуют о вовлеченности рецептора RAGE в стимуляцию образования NO и реализацию прооксидантного действия микроорганизмов и фрагментов нуклеиновых кислот, накапливающихся в очагах воспаления и детектируемых в циркуляции при генерализованных инфекциях. По нашим данным, рецептор RAGE является участником апоптотических сигнальных каскадов, инициируемых внеклеточными фрагментами ДНК. Учитывая известный факт о повышении экспрессии RAGE при гипергликемии, можно предположить, что полученные данные имеют значение и для понимания механизмов иммунных патологий, ассоциированных с сахарным диабетом.