ИСТИНА

Терапевтическое применение противоопухолевых ферментных препаратов, катализирующих деплецию определенных незаменимых аминокислот, основано на данных об отсутствии или низкой активности соответствующих синтетаз аминокислот в некоторых типах опухолевых клетках. Среди представителей этой группы ферментов L-аспарагиназы (АСП), L-лизин-альфа-оксидазы, метиониназы, аргининдезиминазы и др. L-аспарагиназы из E. coli (EcA) и Erwinia chrysanthemi (ErA) используются в первой линии стандартной терапии острого лимфобластного лейкоза, а также при лечении других видов опухолей: лимфогранулематоза, множественной миеломы и др. Однако, длительное терапевтическое применение белковых препаратов (в т.ч. из бактериальных источников) вызывает образование нейтрализующих антител и развитие иммунологической гиперчувствительности вплоть до анафилактического шока, из-за чего терапию часто приходится прекращать преждевременно. Повышение переносимости препаратов АСП путём повышения их эффективности (и понижения дозировки), а также снижения иммуногенности, могло бы способствовать более полной реализации их терапевтического потенциала. Нами исследована серия препаратов АСП из различных источников, включая нативные и мутантные формы из Erwinia carotovora (EwA), Rhodospirillum rubrum (RrA), Wollinella succinogenes (WsА) и др. (EсА, ErA, HpA). Было найдено, что каталитическая активность препаратов АСП измеренная по аспарагину далеко не всегда коррелирует с их цитостатической активностью на культурах опухолевых клеток. Для многих препаратов воспроизводимо наблюдаются кратные отклонения по активности при измерениях на клеточных линиях от «ожидаемых» исходя из величины АСП ферментативной активности (в той же дозировке). Это невозможно объяснить различной чувствительностью раковых линий к деплеции аспарагина, потому что, будучи малочувствительна к одной АСП, та же клеточная линия может оказаться высокочувствительна к другой АСП в той же самой дозировке по МЕ ферментативной активности. Отсутствие явных закономерностей в отклонениях по цитостатической активности АСП на разных клеточных линиях может указывать на не до конца понятный, и, многофакторный механизм их цитостатического действия. Нами показано, что кроме способности гидролизовать L-аспарагин, RrA способны интернализоваться в лейкозные клетки, что объясняет повышенную противоопухолевую активность фермента (по сравнению с ожидаемой исходя из активности по L-асп). Другие же изученные нами АСП не способны проникать внутрь исследованных клеток. С другой стороны, нами было найдено, что некоторые из видов химической модификации АСП не только повышают их удельную ферментативную активность и стабильность в физиологических условиях, но также и делают их воспроизводимо более активными на клеточных линиях. С этой точки зрения, нами разработаны перспективные препараты из RrA. Мы обнаружили что при модификации RrA катионными разветвленными со-полимерами хитозана и ПЭГ, и др наблюдается кратно более высокая антипролиферативная активность против всех имевшихся в нашем распоряжении клеточных линий и более высокая эффективность интернализации в опухолевые клетки. Активность на клеточных культурах возрастает кратно, в том числе, по сравнению с EcA и ErA, зарегистрированными в качестве фармацевтических препаратов в России и за рубежом. Полученные модифицированные АСП могут быть основой для создания новых противолейкозных препаратов с повышенной активностью и переносимостью