ИСТИНА

Белки группы одорант-связывающих белков (OBP) представляют интерес для фундаментальных исследований процессов фолдинга белков, имеющих топологию β-бочонка. Исследования структуры и функций OBP также актуальны в связи с возможностью использования этих белков в качестве чувствительного элемента оптических биосенсорных систем на опасные, в том числе взрывчатые и токсичные вещества. Классический OBP имеет мономерную структуру, β-бочонок которого образован восемью β-ветвями, коротким α-спиральным участком, и следующими за ними девятой β-ветвью и неупорядоченным C-концевым участком. Бычий OBP (bOBP) имеет уникальную димерную укладку полипептидной цепи, при которой α-спираль каждого мономера связывается с β-бочонком другой мономерной субъединицы посредством «обмена доменами». В данной работе исследованы структурные особенности рекомбинантного bOBP и его мутантных форм bOBP-Gly121+ и bOBP-Gly121+/W64C/H155C (GCC-bOBP), и GCC-bOBP-W17F и GCC-bOBP-W133F, содержащих один триптофановый остаток, с помощью методов собственной флуоресценции белков, КД в ближней и дальней УФ-области и метода гель-фильтрации. Показано, что рекомбинантный bOBP выделяется в стабильном нативно-подобном состоянии в виде смеси мономеров и димеров. Вставка Gly121+ приводит к нарушению «обмена доменов» и формированию стабильного мономерного состояния bOBP-Gly121+. Введение дисульфидной связи необходимо для стабилизации мономерной укладки GCC-bOBP. Исследуемые аминокислотные замены, не нарушают функциональную активность мутантных белков. Выявлены особенности микроокружения триптофановых остатков белка, существенные для формирования флуоресцентных свойств белков, на которые ранее не обращали внимания.